ESTUDO CINÉTICO DA INTERAÇÃO DE 5-BROMODEOXIURIDINA NAS CÉLULAS MONONUCLEADAS: CD45+ E CD34- PARA TERAPIA CELULAR MODELO EXPERIMENTAL EM MURINOS

Autores

  • Katherine Athayde Teixeira de Carvalho aculdades Pequeno Príncipe e Instituto Pelé Pequeno Príncipe de Pesquisa – Curitiba / PR – Brasil Divisão de Bioprocessos do Departamento de Engenharia da UFPR – Curitiba / PR – Brasil.
  • Julio César Francisco Divisão de Bioprocessos do Departamento de Engenharia da UFPR – Curitiba / PR – Brasil.
  • Rossana Baggio Simeoni Instituto de Ciências Biológicas e da Saúde, da Pontifícia Universidade Católica do Paraná (ICBS-PUCPR) – Curitiba / PR – Brasil.
  • Larissa Zocche Faculdades Pequeno Príncipe e Instituto Pelé Pequeno Príncipe de Pesquisa – Curitiba / PR – Brasil.
  • Ana Carolina Irioda Divisão de Bioprocessos do Departamento de Engenharia da UFPR – Curitiba / PR – Brasil.
  • Jeane Edwiges Ruvinski Instituto de Ciências Biológicas e da Saúde, da Pontifícia Universidade Católica do Paraná (ICBS-PUCPR) – Curitiba / PR – Brasil.
  • Ricardo Correa Cunha Divisão de Bioprocessos do Departamento de Engenharia da UFPR – Curitiba / PR – Brasil.
  • Leila de Oliveira Hospital de Clínicas da UFPR – Hematologia/Imunofenotipagem – Curitiba / PR – Brasil.

DOI:

https://doi.org/10.53855/bjt.v11i3.296

Palavras-chave:

Células Tronco, Medula Óssea, Terapia Celular

Resumo

A 5-bromodeoxiuridina é uma substância marcadora análoga da timidina que permite a realização de técnicas como a imunocitoquímica e utilizada para identificar as células que se proliferam na fase S do ciclo celular. Objetivo: Estabelecer protocolo do tempo de incubação para marcação celular com a 5-bromodeoxiuridina de células-tronco mononucleadas derivadas da medula óssea através de estudo cinético para sua utilização na bioengenharia tecidual. Métodos: 16 ratos machos da linhagem Wistar com peso médio de 300g foram utilizados. A coleta do sangue da medula óssea foi realizada através de punção-aspiração da crista ilíaca. O isolamento das células-tronco derivadas da medula óssea (fração mononucleada) foi feito através do gradiente de densidade (d=1,077). As suspensões de células-tronco mononucleadas da medula óssea (CD45+ e CD34-) foram incubadas com 5-bromodeoxiuridina na concentração final de 10 mM à 37º C em períodos pré- estabelecidos de 1h, 5h, 16h e 24h e para cada amostra obtida, seguidos do método de imunofluorescência direta. Resultados: Em todos os períodos de incubação a marcação positiva para 5-bromodeoxiuridina foi observada, demonstrando-se células em replicação em atividade proliferativa naquelas suspensões; mas a partir das 16hs, as marcações foram em maior número e mais evidentes (55%±4%, 16h e 53±6%, 24h versus 12%±3, 1h e 23±4, 5h). Conclusões: Os períodos de incubação BrdU para células-tronco da medula óssea (fração mononucleada) a partir de 16hs demonstraram ser a melhor opção para evidenciar a atividade proliferativa, sugerindo seu uso incluído na rotina de terapia celular na avaliação prognóstica do potencial de integração no tecido transplantado e substituindo a timidina radioativa.

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Publicado

2008-06-01

Como Citar

Carvalho, K. A. T. de, Francisco, J. C., Simeoni, . R. B., Zocche, L., Irioda, A. C., Ruvinski, J. E., Cunha, R. C. ., & Oliveira, L. de. (2008). ESTUDO CINÉTICO DA INTERAÇÃO DE 5-BROMODEOXIURIDINA NAS CÉLULAS MONONUCLEADAS: CD45+ E CD34- PARA TERAPIA CELULAR MODELO EXPERIMENTAL EM MURINOS. Brazilian Journal of Transplantation, 11(3), 944–947. https://doi.org/10.53855/bjt.v11i3.296

Edição

Seção

Artigo Original