ESTUDO CINÉTICO DA INTERAÇÃO DE 5-BROMODEOXIURIDINA NAS CÉLULAS MONONUCLEADAS: CD45+ E CD34- PARA TERAPIA CELULAR MODELO EXPERIMENTAL EM MURINOS

Resumo

A 5-bromodeoxiuridina é uma substância marcadora análoga da timidina que permite a realização de técnicas como a imunocitoquímica e utilizada para identificar as células que se proliferam na fase S do ciclo celular. Objetivo: Estabelecer protocolo do tempo de incubação para marcação celular com a 5-bromodeoxiuridina de células-tronco mononucleadas derivadas da medula óssea através de estudo cinético para sua utilização na bioengenharia tecidual. Métodos: 16 ratos machos da linhagem Wistar com peso médio de 300g foram utilizados. A coleta do sangue da medula óssea foi realizada através de punção-aspiração da crista ilíaca. O isolamento das células-tronco derivadas da medula óssea (fração mononucleada) foi feito através do gradiente de densidade (d=1,077). As suspensões de células-tronco mononucleadas da medula óssea (CD45+ e CD34-) foram incubadas com 5-bromodeoxiuridina na concentração final de 10 mM à 37º C em períodos pré- estabelecidos de 1h, 5h, 16h e 24h e para cada amostra obtida, seguidos do método de imunofluorescência direta. Resultados: Em todos os períodos de incubação a marcação positiva para 5-bromodeoxiuridina foi observada, demonstrando-se células em replicação em atividade proliferativa naquelas suspensões; mas a partir das 16hs, as marcações foram em maior número e mais evidentes (55%±4%, 16h e 53±6%, 24h versus 12%±3, 1h e 23±4, 5h). Conclusões: Os períodos de incubação BrdU para células-tronco da medula óssea (fração mononucleada) a partir de 16hs demonstraram ser a melhor opção para evidenciar a atividade proliferativa, sugerindo seu uso incluído na rotina de terapia celular na avaliação prognóstica do potencial de integração no tecido transplantado e substituindo a timidina radioativa.